골관절염(OA)은 65세 이상의 노인 인구에 영향을 미치는 장기간의 만성 퇴행성 뼈 관절 질환 중 하나입니다.
1]. 일반적으로 골관절염 환자는 연골 손상, 윤활막 염증, 연골 세포 침식으로 진단되어 통증과 신체적 고통을 유발합니다.
2]. 관절염 통증은 주로 염증에 의한 관절 내 연골의 퇴화로 인해 발생하며, 연골의 손상이 심할 경우 뼈끼리 부딪혀 견딜 수 없는 통증과 신체적 어려움을 겪을 수 있다.
3]. 관절의 통증, 부기, 경직 등의 증상에 염증 매개체가 관여한다는 사실은 잘 기록되어 있습니다. OA 환자의 경우 연골과 연골하골의 침식을 유발하는 염증성 사이토카인이 윤활액에서 발견됩니다.
4]. OA 환자가 일반적으로 겪는 두 가지 주요 불만 사항은 통증과 윤활막 염증입니다. 따라서 현재 OA 치료법의 주요 목표는 통증과 염증을 낮추는 것입니다. [
5]. 비스테로이드성 및 스테로이드성 약물을 포함한 이용 가능한 OA 치료법은 통증과 염증을 완화하는 데 효능이 입증되었지만 이러한 약물을 장기간 사용하면 심혈관, 위장관 및 신장 기능 장애와 같은 심각한 건강상의 결과를 초래할 수 있습니다.
6]. 따라서 골관절염 치료를 위해서는 부작용이 적고 보다 효과적인 약이 개발되어야 한다.
자연 건강 제품은 안전하고 쉽게 구할 수 있다는 이유로 점점 인기가 높아지고 있습니다.
7]. 관절염을 비롯한 여러 염증성 질환에 대한 한약의 효능이 입증되었습니다.
8]. 오클랜드 라파 DC. 기의 순환을 촉진하여 통증을 완화하고 위를 진정시키는 등의 약효가 알려져 있으며, 전통적으로 천연 진통제로 사용되어 왔습니다.
9]. 이전 보고서에 따르면 A. lappa는 항염증제를 보유하고 있습니다.
10,
11], 진통제 [
12], 항암제 [
13], 위장보호제 [
14] 효과. A. lappa의 다양한 생물학적 활성은 코스투놀리드(costunolide), 데히드로코스투스 락톤(dehydrocostus lactone), 디히드로코스투놀리드(dihydrocostunolide), 코스투스락톤, α-costol, 사우수레아 락톤 및 코스투스락톤과 같은 주요 활성 화합물에 의해 발생합니다.
15]. 이전 연구에서는 코스투놀리드가 NF-kB 조절과 열충격 단백질 경로를 통해 대식세포를 유도하는 지질다당류(LPS)에서 항염증 특성을 나타냈다고 주장했다.
16,
17]. 그러나 OA 치료를 위한 A. lappa의 잠재적인 활성을 조사한 연구는 없습니다. 본 연구에서는 (monosodium-iodoacetate) MIA 및 아세트산 유발 설치류 모델을 사용하여 OA에 대한 A. lappa의 치료 효과를 조사했습니다.
MIA(Monosodium-iodoacetate)는 동물에서 골관절염의 통증 행동과 병리생리학적 특징을 생성하는 데 사용되는 것으로 유명합니다.
18,
19,
20]. MIA를 무릎관절에 주사하면 연골세포의 대사가 교란되어 골관절염의 주요 증상인 연골 및 연골하골 침식 등의 염증 및 염증 증상을 유발한다.
18]. 아세트산으로 유발된 몸부림 반응은 염증성 통증을 정량적으로 측정할 수 있는 동물의 말초 통증 시뮬레이션으로 널리 간주됩니다.
19]. 마우스 대식세포 세포주인 RAW264.7은 염증에 대한 세포 반응을 연구하는 데 널리 사용됩니다. LPS로 활성화되면 RAW264 대식세포는 염증 경로를 활성화하고 TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS 및 IL-6와 같은 여러 염증 매개체를 분비합니다.
20]. 본 연구에서는 MIA 동물모델, 아세트산 유도 동물모델, LPS 활성화 RAW264.7 세포에서 OA에 대한 A. lappa의 항통증 및 항염증 효과를 평가하였다.
2. 재료 및 방법
2.1. 식물 재료
A. lappa DC의 말린 뿌리. 실험에 사용된 제품은 이푸립제약(주)(서울, 한국)에서 구입했습니다. 가천대학교 한의과대학 한약리학과 이동훈 교수에 의해 확인되었으며, 바우처 검체번호는 18060301로 기탁되어 있다.
2.2. A. lappa 추출물의 HPLC 분석
A. lappa는 환류 장치(증류수, 100°C에서 3시간)를 사용하여 추출되었습니다. 추출된 용액을 여과하고 저압 증발기를 사용하여 농축하였다. A. lappa 추출물은 -80 °C에서 동결 건조 후 44.69%의 수율을 보였습니다. A. lappa의 크로마토그래피 분석은 1260 InfinityII HPLC 시스템(Agilent, Pal Alto, CA, USA)을 사용하여 연결된 HPLC로 수행되었습니다. 색분리에는 EclipseXDB C18 컬럼(4.6 × 250mm, 5μm, Agilent)을 35°C에서 사용했습니다. 총 100mg의 표본을 10mL의 50% 메탄올에 희석하고 10분간 초음파 처리했습니다. 샘플을 0.45μm의 주사기 필터(Waters Corp., Milford, MA, USA)로 여과했습니다. 이동상 조성은 0.1% 인산(A)과 아세토니트릴(B)이었고 컬럼은 다음과 같이 용출되었습니다: 0~60분, 0%; 60~65분, 100%; 65~67분, 100%; 67~72분, 0% 용매 B, 유속 1.0mL/분. 유출물은 10 μL의 주입량을 사용하여 210 nm에서 관찰되었습니다. 분석은 3회 수행되었습니다.
2.3. 동물 사육 및 관리
5주령 수컷 Sprague-Dawley (SD) 쥐와 6주령 수컷 ICR 쥐를 삼타코바이오코리아(경기도, 한국)에서 구입하였다. 동물은 일정한 온도(22 ± 2 °C)와 습도(55 ± 10%) 및 12/12시간의 명암 주기를 사용하는 방에 보관되었습니다. 실험을 시작하기 전 동물들은 일주일 이상 해당 조건에 익숙해졌습니다. 동물은 사료와 물을 자유롭게 공급받았습니다. 모든 동물 실험 절차에서는 가천대학교의 동물 관리 및 취급에 대한 현행 윤리 규정(GIACUC-R2019003)을 엄격히 준수했습니다. 이 연구는 연구자 맹검 및 병행 시험으로 설계되었습니다. 동물실험윤리위원회의 지침에 따라 안락사 방법을 따랐습니다.
2.4. MIA 주사 및 치료
쥐를 sham, 대조군, indomethacin 및 A. lappa의 4개 그룹으로 무작위로 분리했습니다. 2% 이소플루오란 O2 혼합물로 마취시킨 후, 50 μL의 MIA(40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 사용하여 쥐를 무릎 관절에 관절내 주사하여 실험적인 OA를 유도했습니다. 치료는 아래와 같이 진행되었습니다: 대조군과 가짜 그룹은 AIN-93G 기본 식이로만 유지되었습니다. 오직 인도메타신 그룹에는 AIN-93G 식이에 인도메타신(3 mg/kg)이 포함되어 제공되었고 A. lappa 300 mg/kg 그룹에는 A. lappa(300 mg/kg)가 보충된 AIN-93G 식이에 배정되었습니다. 치료는 OA 유도일부터 24일 동안 매일 체중 190~210g당 15~17g의 비율로 계속되었습니다.
2.5. 체중 부하 측정
OA 유도 후, incapacitance-MeterTester600(IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA)을 사용하여 쥐 뒷다리의 체중 부하 능력 측정을 예정대로 수행했습니다. 뒷다리의 체중 분포를 계산했습니다: 체중 지지 능력(%)
